Rekwiżiti għall-Ittestjar tal-Kits ELISA

Agħmel kuntrast tajjeb fit-test formali, għandhom jittieħdu l-kundizzjonijiet tat-test ta 'kontroll pożittiv u negattiv, u l-kampjuni li għandhom jiġu ttestjati għandhom isiru f'żewġ kopji biex tiġi żgurata l-eżattezza tar-riżultati tat-test.

Xi drabi l-isfond huwa ogħla, li jindika reazzjoni mhux speċifika, jista 'jingħalaq minn serum tan-nagħaġ, serum tal-fenek jew BSA.

Għażla ta' kundizzjonijiet sperimentali

F'ELISA, huwa importanti li jintgħażlu diversi kundizzjonijiet sperimentali, inklużi: (1) Għażla ta' trasportaturi ta'-fażi solida: Ħafna sustanzi jistgħu jintużaw bħala trasportaturi ta'-fażi solida, bħal PVC, polystyrene, polyacrylamide u ċelluloża. Jista 'jieħu l-forma ta' pjanċa konkava, tubu tat-test, xoffa, eċċ Fil-preżent, huwa komunement użat biex ikollu pjanċi konkavi tal-polistirene ta '40-tajjeb.

Ma jimpurtax f'liema tip ta 'trasportatur, qabel l-użu jista' jiġi skrinjat: bl-istess ammont ta 'pakkett ta' antiġenu huwa, taħt l-istess kundizzjonijiet sperimentali biex jirreaġixxi, biex josserva jekk ir-reazzjoni li tirrendi l-kulur tagħha hijiex omoġeneità, skond liema hija prestazzjoni tajba ta 'adsorbiment. (2) Pakkett b'għażla ta 'antikorp (jew antiġenu): antikorp (jew antiġenu) adsorbit fuq il-wiċċ tat-trasportatur tal-fażi solida-, is-severità tal-ħtieġa hija aħjar, l-adsorbiment ġeneralment jeħtieġ PH bejn 9.0 sa 9.6. It-temperatura tal-assorbiment, il-ħin u l-ammont tal-proteina għandhom ukoll ċertu impatt, ġeneralment aktar minn 4 gradi C 18 sa 24 siegħa. L-aħjar konċentrazzjoni tal-pakketti tal-proteini jeħtieġ li tiġi ttitrata: wara li jiġu ppakkjati b'konċentrazzjonijiet ta 'proteini differenti (0.1, 1.0 u 10 ?g/ml, eċċ.), Il-valuri OD tal-kampjuni pożittivi huma osservati meta kundizzjonijiet oħra tat-test huma l-istess. Agħżel il-konċentrazzjoni bl-akbar valur OD u l-inqas ammont ta 'proteina.

Għall-biċċa l-kbira tal-proteini, ġeneralment ikun 1 sa 10 ?g/ml. (3) Għażla tal-konċentrazzjoni tax-xogħol ta' l-antikorpi ttikkettjati b'enżima-: l-ewwel, l-effett inizjali tat-titrazzjoni bl-użu tal-metodu ELISA dirett (ara l-parti ta' l-antikorp ittikkettat bl-enżima-).

Imbagħad waħħal kundizzjonijiet oħra jew ħu l-"metodu ta 'array kwadru" (pakkett edgy, referenza għall-kampjun li għandu jiġi eżaminat, u antikorpi ttikkettjati b'enzima- huma dilwizzjonijiet differenti) fis-sistema sperimentali formali tittratta b'mod preċiż il-konċentrazzjoni tax-xogħol tagħha. (4) L-għażla tal-bażi ta 'l-enzima u d-donatur ta' l-idroġenu: l-għażla tad-donatur ta 'l-idroġenu hija rħisa, sigura, b'reazzjoni ċara ta' għoti tal-kulur-, u hija stess hija bla kulur. Xi donaturi tal-idroġenu (eż. OPD, eċċ.) għandhom effetti karċinoġeniċi potenzjali, għandha tingħata attenzjoni biex jiġu protetti. Nies kundizzjonali għandhom jużaw mhux-karċinoġeniċi, sensittività għolja tad-donaturi tal-idroġenu, bħal TMB u ABTS bħalissa hija aktar sodisfaċenti donaturi tal-idroġenu. Wara perjodu ta 'azzjoni, għandhom jiżdiedu aċidi jew alkali qawwija biex iwaqqfu r-reazzjoni. Normalment il-ħin ta 'azzjoni tas-sottostrat, għal 10-30 minuta huwa xieraq. Il-fluwidu tal-użu tas-sottostrat għandu jiġi ppreparat frisk, speċjalment jekk ikun miżjud H2O2 qabel l-użu.