Kif jaħdmu ELISA Kits

Metodu sandwich ta 'antikorp doppju 1. Pakkett: B'0.05MPH9. il-pakkett tal-karbonat huwa buffered biex iddilwa l-antikorp għal kontenut ta' proteina ta' 1 sa 10 ?g/ml. Żid 0.1 ml, 4 gradi C matul il-lejl, fit-toqob ta’ reazzjoni ta’ kull pjanċa tal-polistirene. L-għada, armi s-soluzzjoni fit-toqba u aħselha 3 darbiet b'buffer tal-ħasil għal 3 minuti kull darba.

(fil-qosor, ħasil, l-istess hawn taħt). 2. Żid kampjun: Żid ċertu dilwizzjoni tal-kampjun li għandu jiġi ttestjat 0.1 ml fit-toqba ta' reazzjoni ippakkjata msemmija hawn fuq-, inkuba għal siegħa f'37 grad C. Imbagħad aħsel.

(Fl-istess ħin agħmel toqba vojta, toqba ta 'kontroll negattiv u toqba ta' kontroll pożittiv). 3. Żid antikorpi ttikkettjati enzima-: F'kull toqba ta 'reazzjoni, żid antikorp tikkettat enzima-dilwita friska (dilwizzjoni wara titrazzjoni) 0.1 ml.

Inkuba 0.5 sa siegħa f'37 grad C u aħsel.

4. Żid il-wiri tal-kulur likwidu tas-sottostrat: żid preparazzjoni temporanja ta 'soluzzjoni ta' substrat TMB 0.1 ml, 37 grad C 10 sa 30 minuta f'kull toqba ta 'reazzjoni.

5. Reazzjoni ta 'tmiem: Żid aċidu sulfuriku 2M 0.05 ml għal kull toqba ta' reazzjoni. 6. Ir-riżultati jiddeterminaw: jistgħu jkunu fuq sfond abjad, direttament b'għajnejhom biex josservaw ir-riżultati: iktar ma jkun skur il-kulur ġewwa t-toqba tar-reazzjoni, iktar ikun qawwi l-grad pożittiv, ir-reazzjoni negattiva hija bla kulur jew baxx ħafna, skond il-kulur dep huwa rifless,

Valur Od scanted: fuq it-tester ELISA, f'450nm (jekk rendering tal-kulur BTS, imbagħad 410nm), għal toqba ta 'kontroll vojta żero inġerita biex ikejjel il-valur OD ta' kull toqba, jekk akbar mill-valur OD ta 'kontroll negattiv speċifikat ta' 2.1 darbiet, jiġifieri pożittiv.

Liġi indiretta

1. Uża l-pakkett li għandu jiġi buffered biex iddilwa l-antiġen magħruf għal 1 sa 10 mg/ml, għal kull toqba flimkien ma '0.1 ml, 4 gradi C matul il-lejl;

2. Aħsel 3 darbiet l-għada;

3. Żid ċertu dilwizzjoni tal-kampjun (antikorp mhux magħruf) 0.1 ml fit-toqba ta' reazzjoni ippakkjata msemmija hawn fuq-, inkuba għal siegħa f'37 grad C, aħsel;

4. (kemm kontroll tat-toqba vojt, negattiv kif ukoll pożittiv) fit-toqba tar-reazzjoni, żid it-tieni antikorp tat-tikketta tal-enżima dilwita friska (anti-antikorp) 0.1 ml;

5.37 gradi C inkubazzjoni 35-60 minuta, ħasil;

6.'L-aħħar darba li taħsel bid-DDW. Il-passi li jifdal huma l-istess bħall-"metodu sandwich ta 'antikorp doppju" ta' 4, 5, 6.